Taq polimerasa
La Taq polimerasa de alto rendimiento, los dNTPs, los tampones y las master mix proporcionan una mayor fiabilidad y consistencia para la PCR de punto final de rutina. Los productos GoTaq® ofrecen una gama de formulaciones de Taq ADN polimerasa que permiten realizar aplicaciones como la PCR básica, hot-start PCR y Long PCR.
La GoTaq® G2 es una Taq polimerasa recombinante de longitud completa, que se suministra en tampones diseñados para mejorar la amplificación. Las enzimas GoTaq® están disponibles en fórmulas de tampones con y sin magnesio (Flexi buffers), lo que permite al usuario la opción de optimizar la concentración de MgCl2 en la PCR.
Todos los productos GoTaq® garantizan un alto rendimiento en la PCR. Para una especificidad aún mayor, elija la GoTaq® G2 Hot Start Polymerase, que está unida a un anticuerpo patentado que bloquea la actividad. Dicha actividad se restablece durante la desnaturalización inicial, lo que permite preparar la reacción a temperatura ambiente y proporciona una mayor sensibilidad y especificidad. Para una mayor comodidad, elija una master mix que contenga todos los componentes en una concentración optimizada y dyes para la carga directa en gel.
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Introducción a la Taq polimerasa
La Taq ADN polimerasa, aislada de Thermus aquaticus, es una ADN polimerasa termoestable que cataliza la incorporación cebador-dependiente de nucleótidos en ADN doble hebra en la dirección 5′→3′ en presencia de Mg2+. Es la ADN polimerasa termoestable estándar utilizada en aplicaciones de la PCR. La Taq no posee actividad exonucleasa 3′→5′, pero tiene actividad exonucleasa 5′→3′. Es idónea para la mayoría de las aplicaciones de la PCR que no requieren una enzima de alta fidelidad, como la detección de secuencias específicas de ADN o ARN.
Una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) típica incluye el ADN diana, una ADN polimerasa termoestable como la Taq polimerasa, dos cebadores de oligonucleótidos, dNTPs, tampón de reacción y magnesio. Una vez preparada, la reacción se coloca en un termociclador, que la somete a ciclos recurrentes de cambios de temperatura durante los cuales el ADN se desnaturaliza, los cebadores se acoplan al molde y son extendidos por la polimerasa para crear una copia de la cadena de ADN. Cada ciclo de PCR teóricamente duplica la cantidad de secuencia diana en la reacción hasta que los componentes de la reacción se vuelven limitantes o se consumen.
En la PCR de punto final, el análisis se produce una vez que se han completado todos los ciclos de PCR y la reacción de amplificación ha alcanzado una meseta (o punto final). Esto difiere de la PCR en tiempo real, en la que la formación del producto de la PCR se monitoriza en tiempo real mientras se produce la reacción de amplificación. La PCR de punto final es un método cualitativo. Se utiliza ampliamente para muchos propósitos, incluyendo la determinación de la presencia o ausencia de una secuencia específica de ADN en una muestra, la detección de patógenos, la amplificación de secuencias diana para su posterior análisis, y la detección de secuencias específicas de ADN con el fin de identificar individuos o tipos de células.
Las master mix de PCR contienen todos los componentes para la reacción de PCR, incluyendo la Taq polimerasa, los dNTPs y el tampón optimizado. Estas simplifican la configuración experimental y ahorran tiempo, ya que el usuario sólo tiene que añadir el ADN molde y los cebadores a la reacción.
