PCR

Desde la PCR de punto final hasta la PCR cuantitativa en tiempo real y la RT-PCR, ofrecemos una cartera completa de productos de alta calidad para satisfacer sus necesidades de amplificación. Los productos de PCR de punto final y en tiempo real incluyen la GoTaq® (Taq) DNA Polymerase en cómodas master mix, kits y formulaciones enzimáticas flexibles para PCR básica, hot-start PCR, Long PCR, qPCR y RT-qPCR.

Las líneas de productos de RT-PCR y RT-qPCR en tiempo real incluyen la GoTaq® DNA Polymerase y la GoScript™ Reverse Transcriptase, que proporcionan un rendimiento de transcripción inversa y PCR robusto y fiable, para muestras difíciles y en presencia de inhibidores de la PCR.

Todos los sistemas de PCR, enzimas y reactivos vienen con nuestra garantía de rendimiento de PCR. Si no está completamente satisfecho con cualquier producto de PCR de Promega, le haremos un reemplazo o le reembolsaremos el importe.

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Fundamentos de la PCR

La PCR, la reacción en cadena de la polimerasa, es una técnica fundamental que ha revolucionado la biología molecular. En la PCR, una molécula de ADN es seleccionada y copiada múltiples veces, lo que permite la amplificación exponencial de la secuencia de ADN diana.

Los componentes clave de una reacción de amplificación de la PCR son una polimerasa de ADN termoestable, desoxinucleótidos trifosfatos (dNTP), tampón de reacción y magnesio, dos cebadores de oligonucleótidos y un termociclador que permite realizar ciclos controlados de la temperatura de reacción a través de múltiples series de desnaturalización del ADN, unión del cebador y extensión del ADN.

La PCR de transcripción inversa (RT-PCR) permite identificar las secuencias de ARN. En la RT-PCR, el ARN diana se transcribe primero a ADN de forma inversa antes de la amplificación por PCR.

La qPCR en tiempo real proporciona un análisis más sensible y cuantitativo de una muestra. En la qPCR y en la RT-qPCR, los productos de reacción marcados se detectan en tiempo real a medida que avanza la reacción de amplificación. Los métodos basados en la qPCR son un medio estándar para cuantificar las secuencias de ADN diana o para monitorizar la expresión génica.

Variantes de las ADN polimerasas termoestables se utilizan para optimizar reacciones con fines específicos. Por ejemplo, en la hot-start PCR, la ADN polimerasa no se activa hasta que se alcanza la temperatura de desnaturalización. Esto minimiza la formación de productos de amplificación inespecíficos y permite la comodidad de la preparación de la reacción a temperatura ambiente. Uno de los métodos más eficientes para las reacciones hot-start puede lograrse utilizando anticuerpos que bloqueen la actividad de la Taq polimerasa.

La Long PCR puede lograrse utilizando una mezcla de polimerasas termoestables, como la Taq ADN polimerasa y una enzima correctora que carece de la actividad exonucleasa 3'-5', que elimina las bases incorporadas incorrectamente en la cadena de ADN sintetizada. Esto permite una mayor precisión y la generación de secuencias diana más largas. Las polimerasas termoestables de alta fidelidad, como la Pfu, tienen una baja tasa de error y también poseen actividad exonucleasa de 3' a 5'.