Inmunoensayos

Los reactivos para inmunoensayos y los sistemas de detección basados en anticuerpos de Promega incluyen los novedosos Lumit® Immunoassays, así como una gama de anticuerpos primarios y secundarios y reactivos de detección utilizados en las técnicas ELISA o Western blot tradicionales.

Los Lumit® Immunoassays constituyen una alternativa sencilla y rápida a los métodos de inmunoensayo convencionales, incluidos los ELISA tipo sándwich y los Western blots. Este método basado en la bioluminiscencia puede completarse en tan sólo 30 minutos. Ofrecemos varios tipos de Lumit® Immunoassays para uso en investigación, incluidos kits específicos para detectar la fosforilación de proteínas, citoquinas, metabolitos o la unión del receptor Fc neonatal. También disponemos de reactivos de detección Lumit® y kits de marcaje para construir tus propios ensayos Lumit®.

¿Qué son los inmunoensayos?

Los inmunoensayos son métodos de detección prácticos y ampliamente utilizados que se basan en la capacidad de los anticuerpos para unirse a antígenos específicos y así poder detectarlos. Las técnicas ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assays) y Western blot son ejemplos típicos de inmunoensayos de uso común.

Los ELISA se realizan en placas multipocillo en varios formatos. En un ELISA tipo sándwich, un anticuerpo se une a la superficie de la placa y se utiliza para capturar un antígeno diana de una muestra como plasma o suero. Tras un lavado a fondo, se añade un segundo anticuerpo, que se une al antígeno, creando un "sándwich" anticuerpo-antígeno-anticuerpo. Este segundo anticuerpo puede marcarse con un sustrato enzimático que permita la detección, o puede detectarse con un anticuerpo secundario marcado de forma específica para cada especie (por ejemplo, IgG antihumana). En otros formatos ELISA, el antígeno diana puede unirse directamente a la placa y utilizarse para detectar anticuerpos presentes en una muestra. Estos anticuerpos unidos se detectan a continuación utilizando un anticuerpo secundario marcado.

En un inmunoensayo enzimático, la enzima unida al anticuerpo detector genera una señal de color proporcional a la cantidad de antígeno diana presente en la muestra. Dependiendo del formato del inmunoensayo, el grado de color puede detectarse y medirse mediante un lector de placas espectrofotométrico o de fluorescencia.

En el Western blot, las proteínas individuales presentes en una muestra se separan en un gel y se transfieren a una membrana de nitrocelulosa, que se expone a anticuerpos marcados dirigidos contra antígenos específicos. Tras el lavado, los anticuerpos unidos se visualizan por la generación de una señal (color, fluorescencia o quimioluminiscencia) generada por el anticuerpo primario marcado o un anticuerpo secundario.

Las técnicas ELISA y Western blot ofrecen ventajas de especificidad, sensibilidad y relativa facilidad de uso. Sin embargo, requieren mucho tiempo, ya que implican numerosos pasos de lavado e incubación. El número de pasos implicados también puede dar lugar a una variabilidad significativa de ensayo a ensayo.

Los Lumit® Immunoassays se diferencian de los Western blots y los ELISA en que proporcionan un método basado en la bioluminiscencia, sin lavado, para detectar diversas moléculas diana en un formato rápido y sensible. Los Lumit® Immunoassays se basan en la NanoLuc® Binary Technology (NanoBiT®). En los Lumit® Immunoassays, los anticuerpos o antígenos se marcan químicamente con las subunidades pequeña y grande de la luciferasa NanoBiT®, conocidas como SmBiT y LgBiT, respectivamente. En presencia de la molécula diana, las dos subunidades se aproximan, lo que permite que SmBiT y LgBiT formen una enzima activa y generen una señal de luminiscencia brillante, que se detecta mediante un lector de microplacas.