RT-PCR
Los productos de Promega para la transcripción inversa (RT-PCR) incluyen transcriptasas inversas (AMV, M-MLV y GoScript) y una gama de kits completos que contienen todas las enzimas, tampones y reactivos necesarios para una RT-PCR satisfactoria.
La GoScript™ Reverse Transcriptase incluye la transcriptasa inversa M-MLV y un tampón patentado diseñado para la síntesis robusta y fiable de ADNc, a partir de una gama completa de transcritos poco frecuentes o abundantes. GoScript™ está disponible en cómodas mezclas con primers Oligo(dT) o random primers, como parte de un kit completo o como enzima individual.
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Introducción a la RT-PCR
Las transcriptasas inversas son ADN polimerasas dirigidas por ARN, que sintetizan una copia de ADN (ADNc) a partir de un ARN molde. Para aplicar la PCR al estudio del ARN, la muestra de ARN debe primero transcribirse a ADNc, para generar el molde de ADN necesario para la posterior PCR.
En la RT-PCR, tras un paso inicial de transcripción inversa para producir el molde de ADNc, se realiza la PCR para amplificar la secuencia diana. En la RT-PCR de un paso, la transcripción inversa y la PCR se realizan en una sola reacción. En la RT-PCR de dos pasos, la reacción de transcripción inversa se realiza por separado y el ADNc generado se añade a una PCR a posteriori.
La AMV Reverse Transcriptase se recomienda para la RT-PCR de un paso y de dos pasos, la RT-qPCR, la transcripción inversa de ARN <5kb y la extensión de cebadores, especialmente si el ARN molde tiene una sólida estructura secundaria.
La M-MLV Reverse Transcriptase RNasa H - Point Mutant es la enzima de elección en la transcripción inversa de ARN de gran longitud para la construcción de bibliotecas de ADNc, la generación de sondas de ADNc y la extensión de cebadores.
GoScript™ Reverse Transcriptase es una formulación de M-MLV optimizada para su uso en RT-qPCR de un paso y de dos pasos y en la transcripción inversa de dianas poco frecuentes o abundantes. GoScript™ funciona en presencia de muchos de los inhibidores de la amplificación.
