pGEM®-T Vector Systems
Convenience for Cloning PCR Products
- Insert excision with a BstZI single digest
- Ligation can be completed in 1 hour at room temperature
- Available with or without competent cells
Catalog Number:
Size
Add competent cells
Catalog Number: A3600
Catalog Number: A3610
Clonación eficiente con vectores T y una selección azul/blanco
Los pGEM®-T Vector System son sistemas idóneos para clonar productos de PCR generados por ciertas polimerasas termoestables. Estas polimerasas suelen añadir una sola desoxiadenosina, independientemente de la plantilla, a los extremos 3' de los fragmentos amplificados. El pGEM®-T Vector está listo para su uso en reacciones de ligación, preparado cortando el pGEM®-5Zf(+) Vector con EcoRV y añadiendo una timidina terminal en ambos extremos 3'. Estos extremos 3'-T en el sitio de inserción mejoran en gran medida la eficacia de la ligación de un producto de PCR en el plásmido al evitar la recircularización del vector y proporcionar un extremo compatible para la ligación de productos PCR con extremos A.
El pGEM®-T Vector procede del pGEM®-5Zf(+) Vector (GenBank® Accession No. X65308). El pGEM®-T Vector se creó linealizando el pGEM®-5Zf(+) Vector con EcoRV en la base 51 y añadiendo una T en ambos extremos 3´. La posición de la T está indicada con un * en la secuencia del pGEM®-T Vector (.txt).
En el pGEM®-T Vector, los promotores de la ARN polimerasa T7 y SP6 se encuentran en una región de clonación múltiple dentro de la región que codifica al péptido α de la β-galactosidasa. La inactivación por inserción del péptido α permite identificar de forma directa los clones recombinantes mediante un cribado azul/blanco en placas indicadoras. El vector permite la preparación de ADN monocatenario gracias a su origen de replicación f1.
La región de clonación múltiple está rodeada de sitios de reconocimiento de la enzima de restricción BstZI, lo que permite liberar el inserto mediante la digestión de una sola enzima. Otra opción podría ser realizar una doble digestión para liberar el inserto del vector.
El pGEM®-T Vector System II contiene células competentes JM109 además de todos los componentes del Vectores pGEM®-T Vector System I.
Referencias
- Mezei, L.M. and Storts, D.R. (1994) In: PCR Technology: Current Innovations, Griffin, H.G. and Griffin, A.M., eds., CRC Press, Boca Ratón, FL, 21.
- Robles, J. and Doers, M. (1994) Promega Notes 45, 19-20.
- Clark, J.M. (1988) Nucl. Acids Res. 16, 9677-86.
- Newton, C.R. and Graham, A. (1994) In: PCR, BIOS Scientific Publishers, Ltd., Oxford, UK, 13.
Protocols
Complete Protocol
Protocolos Rápidos
Specifications
Catalog Number:
Contenido
| Item | Part # | Presentación | Available Separately |
|---|---|---|---|
|
pGEM®-T Vector |
A362A | 1 × 1.2μg | |
|
Control Insert DNA |
A363A | 1 × 12μl | |
|
2X Rapid Ligation Buffer |
C671A | 1 × 200μl | View Product |
|
T4 DNA Ligase |
M180A | 1 × 100u |
SDS
Search for SDSCertificado de Análisis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Condiciones de Almacenaje
See Protocol for detailed storage recommendations.
Contenido
| Item | Part # | Presentación | Available Separately |
|---|---|---|---|
|
pGEM®-T Vector |
A362A | 1 × 1.2μg | |
|
Control Insert DNA |
A363A | 1 × 12μl | |
|
2X Rapid Ligation Buffer |
C671A | 1 × 200μl | View Product |
|
JM109 Competent Cells, High Efficiency |
L200A | 6 × 200μl | |
|
T4 DNA Ligase |
M180A | 1 × 100u |
SDS
Search for SDSCertificado de Análisis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Condiciones de Almacenaje
See Protocol for detailed storage recommendations.
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