Proteasas para espectrometría de masas

Por lo general, las proteínas se digieren con proteasas para generar péptidos para el análisis por espectrometría de masas seguido de secuenciación (MS en tándem). Ofrecemos una gama de proteasas cualificadas para su uso en la preparación de muestras para espectrometría de masas.

Las proteasas disponibles para la digestión óptima de proteínas en espectrometría de masas incluyen tripsina, tripsina/Lys-C, rLys-C, Lys-C, rAsp-N y más. También ofrecemos ProteaseMAX™ Surfactant para mejorar la digestión en gel y la solubilización de proteínas.

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¿Qué son las proteasas y los tensioactivos?

La proteómica ascendente se centra en el análisis de mezclas de proteínas tras la digestión enzimática de las proteínas en péptidos. La compleja mezcla de péptidos resultante se analiza mediante cromatografía líquida en fase inversa (RP-LC) acoplada a espectrometría de masas en tándem (MS/MS). La identificación de los péptidos, y posteriormente de las proteínas, se completa cotejando los espectros de iones de fragmentos peptídicos con espectros teóricos generados a partir de bases de datos de proteínas.
La tripsina es la proteasa más utilizada en la preparación de muestras para espectrometría de masas. Es una proteasa de serina altamente específica, que escinde en el lado carboxílico de los residuos de lisina y arginina. La digestión de proteínas con tripsina genera péptidos de tamaños óptimos para el análisis por espectrometría de masas.
Hay ciertas proteínas y mezclas de proteínas en las que la digestión con tripsina por sí sola no es suficientemente eficaz. Algunos ejemplos son la digestión de proteínas de membrana y el análisis de las modificaciones postraduccionales (PTM) de las histonas. La digestión con una proteasa alternativa, individualmente o en combinación con tripsina, crea un mapa peptídico único que puede incluir secuencias que no se observan con la digestión de tripsina sola. La superposición de péptidos obtenidos con proteasas alternativas y tripsina aumenta la cobertura y la fiabilidad en la identificación de proteínas.