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Single Step (KRX)
sono le Cellule Competenti ad alta efficienza di trasformazione adatte per
il
clonaggio
e per
l’espressione strettamente controllata di proteine
ricombinanti.
Con
Single Step (KRX)
è possibile
clonare
ed esprimere
la proteina di interesse
in 48 ore
con
un’unica
trasformazione!
Nelle Single Step (KRX) i livelli di
espressione proteica basale sono 7 – 20 volte più bassi
rispetto al sistema classico basato su
BL21(DE3)/IPTG,
mentre i livelli di proteina indotta (“fold induction”) sono simili e/o
superiori
rispetto al sistema classico.
Nelle
Single Step (KRX)
l’espressione
della T7 RNA polimerasi -
responsabile della trascrizione del gene target -
è guidata dal
promotore del ramnosio
ed è strettamente regolata mediante
la presenza nel medium di glucosio e ramnosio.
Quando solo
il glucosio
è presente il
promotore del ramnosio è
represso totalmente.
L’aggiunta di ramnosio permette un’induzione
molto elevata del promotore e quindi
una
massiva espressione della proteina di interesse.
Il ramnosio
non viene metabolizzato e quindi non si consuma durante le
crescita/induzione batterica.
1A.
Comparazione dei livelli di espressione della Luciferasi in diversi ceppi
batterici prima (grafico piccolo) e dopo induzione.
1B. Calcolo dell’induzione,
“Induction Ratio”, come rapporto tra i valori di luminescenza normalizzati
dopo l’induzione e prima dell’induzione.
Caratterisitiche genetiche delle Single Step (KRX) Competent Cells:
-
EndA- (evita la
degradazione plasmidica ad opera delle nucleasi)
-
RecA- (elimina
eventi di ricombinazione non desiderati)
-
a-complementazione:
compatibilità con screening bianco/blu
-
DompT,
DompP
(delezioni di proteasi responsabili della degradazione di proteine
sovra-espresse in E.Coli)
-
Efficienza di
trasformazione > 108 cfu/mg
| Codice |
Prodotto |
conf. |
Prezzo 2009 |
| L3002 |
Single Step (KRX) Competent Cells |
20 x 50 ml |
€ 295,00 |
| L3001 |
Single Step (KRX) Competent Cells |
5 x 200 ml |
€ 245,00 |
| L5701 |
L-Rhamnose Monohydrate |
10 g |
€ 55,00 |
| L5702 |
L-Rhamnose Monohydrate |
50 g |
€ 195,00 |
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