Proteincharakterisierung
Themen auf dieser Seite:
1. Trypsin-Gold »
2. ProteaseMax™ »
3. Immobilisiertes Trypsin »
4. Endoproteinase Lys-C »
1. Trypsin-Gold
Die Qualität der Proteasen ist ein wichtiger Baustein für eine erfolgreiche Probenvorbereitung. Trypsin von geringer Qualität unterliegt häufig einer Autoprotolyse, die zur Bildung von
Pseudotrypsin mit Chymotrypsin-ähnlicher Aktivität führt. Eine solche Aktivität in einem Probenansatz würde zusätzliche Peptidfragmente generieren, die mit der späteren Datenbankanalyse interferieren können. Zusammen mit ProteaseMax™ bilden die Trypsinpräparationen ein unschlagbares Team bei der Proteinprobenvorbereitung für die MS Analyse.
| Vorteile: | |
| Anwenderfreundlich | Kompatibel mit ProteaseMax™ Surfactant, Trypsin Enhancer |
| Stabil | Resistent gegenüber milden denaturierenden Bedingungen |
| Zuverlässig | Reduktive Methylierung verhindert den autolytischen Verdau |
| Sicher | Behandlung mit TPVK inaktiviert Chymotrypsin |
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Weitere Proteasen:
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2. ProteaseMax™
Der ProteaseMax™ Surfactant, Trypsin Enhancer ist ein neues Reagenz, das den Trypsinverdau insbesondere bei Membranproteinen verbessert und die Peptidausbeute bei Gelextraktionen erhöht. ProteaseMax™ ist so konzipiert, dass es über den Verlauf eines Trypsinverdaus degradiert und daher die MS Analyse nicht stört.
Abb.: Ein zytoplasmatischer Proteinextrakt aus dem Herzen einer Maus wurde auf einem 4-20% SDS-PAGE Gel elektrophoretisch aufgetrennt. Anschließend wurde die Proteinbande mit der Masse von 47 kDa aus dem Gel ausgeschnitten, tryptisch verdaut und massenspektroskopisch untersucht.
A. Standardverdauprotokoll ohne ProteaseMax™ über Nacht bei 37°C
B. Mit ProteaseMax™ über 3 Stunden bei 37°C
| Vorteile: | |
| Schnell | Verkürzt den Trypsinverdau auf 1 Stunde, verbesserte Peptidausbeute |
| Zuverlässig | Bessere Sequenzabdeckung und höhere MASCOT scores |
| Anwenderfreundlich | Keine nachträgliche Inaktivierung notwendig, beeinflusst nicht die MS Analyse |
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3. Immobilisiertes Trypsin
Immobilisiertes Trypsin erlaubt den schnellen und einfachen Verdau von Proteinen in Lösung. Die Elution der verdauten Peptide erfolgt mittels Zentrifugation, wobei das Trypsin auf der Säule verbleibt.
| Vorteile: | |
| Schnell | Proteolytischer Verdau innerhalb von 30 Minuten |
| Skalierbar | Erlaubt den Verdau unterschiedlichster Proteinmengen |
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4. Endoproteinase Lys-C
Lys-C hydrolisiert spezifisch am C-terminalen Ende von Lysin.
| Vorteile: | |
| Robust | Funktionalität von Lys-C im pH-Bereich von 7,0 - 9,0 |
| Flexibel | Verdau in Lösung und in-Gel Verdau möglich |
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