TNT® T7 Insect Cell Extract Protein Expression System
Funktionelle ProteineTranslationale Modifikation möglich |
10 Reaktionen
40 Reaktionen Protokoll (PDF) » |
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SchnellExpression in 4 Stunden |
Hohe ProteinmengeBis zu 75µg/ml Protein im Coomassie-Gel nachweisbar |
EinfachDNA zugeben und inkubieren |
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Das TNT® T7 Insect Cell Extract Protein Expression System (aus Spodoptera frugiperda SF21) ist besonders für die Expression von funktionellen Proteinen geeignet. Es zeichnet sich gegenüber anderen Methoden durch Schnelligkeit und Einfachheit aus.
Proteine wurden mit dem TNT® T7 ICE Protein Expression System exprimiert
und mit FluoroTect™ Green markiert. Detektion durch Typhoon 9410 Imager
(GE Healthcare)
Spur 1 + 2: Marker, Spur 3: leer, Spur 4: Firefly Luciferase,
Spur 5: ß-Galactosidase, Spur 6: Renilla Luciferase, Spur 7: HaloTag™, Spur 8:
Pro-Caspase-3, Spur 9: nur FluoroTect™, Spur 10: nur DNA.
Die zellfreie Proteinexpression wird direkt mit DNA als Ausgangsmaterial durchgeführt, wodurch der zeitaufwändige Prozess der in vitro RNA-Synthese wegfällt. Alle für die Trankription/Translation benötigten Komponenten sind im TNT® T7 ICE Master Mix enthalten. Nur das DNA-Template muss noch hinzugegeben werden. Die Reaktion bei 28 – 30°C ist bereits nach 4 Stunden abgeschlossen.
Die Proteine werden von Genen, die hinter den T7 Promotor kloniert wurden, exprimiert. Für maximale Ausbeuten (bis zu 75µg/ml) empfehlen wir die speziell für das System optimierten Expressionsvektoren (pF25A und pF25K).
Anwendungen:
- Funktionelle Screenings
- Protein-Protein-Interaktionsstudien
- Protein-DNA-Interaktionen