GloSensor™ cAMP Assay

Lebend-Zell-Assay Nicht-lytischer Assay für die Echtzeit cAMP Messung in lebenden Zellen	Protokoll (PDF) »	GloSensor™ cAMP HEK293 Cell Line pGloSensor™-20F cAMP Plasmid GloSensor™ cAMP Reagent
Flexibel Zelllinie oder Plasmid für die transiente Transfektion erhältlich	Einfaches Protokoll Ideal for HTS & uHTS (z.B. 3456-Well Formate)	Einfache Detektion Standardluminometer ist ausreichend
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Der neue GloSensor™ cAMP Assay misst Veränderungen der intrazellulären cAMP Konzentration in lebenden Zellen mittels eines neuartigen nicht-lytischen Assayformats.
Der Assay kann für die Messung der Aktivität von G-Protein gekoppelten Rezeptoren (GPCRs) sowohl im geringen Durchsatz als auch im Hochdurchsatz eingesetzt werden.

Das Prinzip der cAMP Messung ist abgeleitet aus der GloSensor™ Technologie, die auf einer genetisch modifizierten Firefly Luciferase basiert. Die Luciferase kann durch transiente Transfektion in einer beliebigen Zelllinie exprimiert werden. Darüber hinaus sind HEK293 Zellen erhältlich, die mit dieser Luciferase stabil transfiziert sind.

Die genetisch modifizierte Firefly Luciferase enthält in ihrer Sequenz ein cAMP-bindendes Protein. In Abwesenheit von cAMP ist die Luciferase inaktiv. Nach Bindung von cAMP tritt eine Konformationsänderung ein, die zu einer erhöhten Aktivität der Luciferase und in Gegenwart von GloSensor™ cAMP Reagent zur Bildung von Lichtsignalen führt. Das Lichtsignal ist dabei abgängig von der Menge des gebildeten cAMPs und der Potenz des Modulators des jeweiligen GPCR, welcher typischer Weise an Gs oder Gi Proteinen gekoppelt ist.