Apo-One^® Homogeneous Caspase-3/7

Flexibel Messung ab 30 Minuten bis 18 Stunden oder länger. Mit Zelllinien oder Enzympräparationen	Protokoll (PDF) »	Einfach Direkte Zugabe des Reagenz (nur 1 Pipettierschritt, homogener Assay)
Sensitiv Ca. 600 apoptotische Zellen im 96-Well-Format. Anwendungsbeispiel »	Robust Hoher Z’-Faktor, gutes Signal/Hintergrund-Verhältnis	Multiplexing Normalisierung durch CellTiter-Blue® Cell Viability Assay mit derselben Probe möglich. Anwendungsbeispiel »
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Der Apo-ONE^® Homogeneous Caspase-3/7 Assay verwendet ein fluoreszenzmarkiertes Substrat (Z-DEVD-R110) zum Nachweis aktiver Caspasen-3 und -7 aus den verschiedensten Ausgangsmaterialien (Enzymfraktionen, Zellextrakte, Zellkultur).
Das Fluoreszenzsignal ist dabei direkt zur Menge aktivierter Caspasen proportional. Wie bei allen homogenen zellbasierten Assays von Promega wird das Apo-ONE^®-Reagenz aus Substrat und Puffer lediglich angesetzt, zu den Zellen gegeben und gemischt. Nach kurzer Inkubation kann das Signal gemessen werden ("add and read").
Durch die Kopplung von Rhodamin-110 an das Caspasesubstrat (Ex_max 498 nm/Em_max 521 nm) wird eine wesentlich höhere Sensitivität als bei vergleichbaren fluoreszenten Assays erreicht (ca. 600 apoptotische Zellen im 96-Well-Format).
Mit derselben Zellprobe kann zur Normalisierung im ersten Schritt mit dem CellTiter-Blue^® Cell Viability Assay die Bestimmung der Anzahl lebender Zellen durchgeführt werden (=Multiplexing), bevor die Zellen durch die Zugabe von Apo-ONE^® lysiert und analysiert werden.
Wir empfehlen die Verwendung im 96- (oder 384-)Well-Format. Der Assay ist allerdings auf jedes andere Format skalierbar.