Produktinformation

Die P450-Glo^TM Screening Systems stellen ein komplettes Reagenzienset zur Durchführung lumineszierender Cytochrom P450-Assays dar. Die P450- Glo^TM –Screeningsysteme können bei Pharma- und Wirkstoffscreenings, sowie in der Forschung zur Untersuchung des Einflusses von Chemikalien und anderen Faktoren auf die P450-Enzymaktivität eingesetzt werden.

Die P450-Glo^TM-Screening-Systeme beinhalten wie die herkömmlichen P450-Glo^TM-Assays (Katalognr. V8751, V8752, V8761, V8762, V8771, V8772, V8781, V8782, V8791, V8792, V8801, V8802, V8811, V8812, V8881, V8882, V8891, V8892) ein Cytochrom P450-Substrat, Luciferin-Nachweisreagenz und Reaktionspuffer. Die P450-Glo^TM-Screening-Systeme umfassen darüber hinaus eine Membranpräparation, die aus Baculovirus-infizierten Insektenzellen hergestellt wurde und rekombinantes humanes Cytochrom P450 und P450-Reduktase (bei CYP2C9 und CYP3A4 außerdem Cytochrom b5) enthält. Als weitere Komponenten des Screening-Systems stehen KPO ₄ -Puffer, luciferinfreies Wasser, ein NADPH-Regenerationssystem, sowie als Negativkontrolle eine Membranfraktion ohne P450-Aktivität zur Verfügung.

Die P450-Glo^TM-Substrate (V9770: Luciferin-ME, V9790: Luciferin-H, V9800: Luciferin-BE) sind Derivate des Käferluciferin. Sie reagieren bei Inkubation mit dem Cytochrom P450-Enzym und dem NADPH-Regenerationssystem zu D-Luciferin. Dieses wird durch Zugabe des Luciferin-Nachweisreagenz mit Hilfe der Luciferase umgesetzt. Das mit der Reaktion einhergehende stabile lichtemittierende Signal ist direkt proportional zur Aktivität des Cytochrom P450 und wird im Luminometer quantifiziert. Die zu testende Substanz kann eine Änderung in der Lumineszenz hervorrufen. Dabei handelt es sich meist um eine Signalreduktion, die auf der Inhibition des Cytochrom P450 durch die Testverbindung beruht. Diese lässt sich durch die Bestimmung des IC ₅₀ -Wertes (d.h. die Konzentration, die zu einer 50%-igen Hemmung der Reaktion führt) charakterisieren.

Hohe Sensitivität und Kostenersparnis durch geringere Mengen schwache Hintergrundsignale: P450 als für HPLC- oder Fluoreszenz- methoden üblich

Geschwindigkeit: durch den lumineszierenden Assay werden zeitintensive Methoden wie HPLC-Analysen umgangen

Lumineszenz: die Lichtemission ist direkt proportional zur P450-Konzentration; keine Störung durch fluoreszierende Verbindungen

Großer Dynamikbereich: hoher Z`-Faktor (>0,8) zeigt die Robustheit und damit die ausgezeichnete Qualität des Assays an

Optimierte Assayzusammensetzung: wenig falsch-positive Ergebnisse
mit stabiler Leuchtkäferluciferase:

Wasserlösliche Substrate: Vermeidung einer möglichen P450-Inhibition durch organische Lösungsmittel

Akkurate IC ₅₀ -Bestimmung: Exakte Konzentrationsbestimmung des Enzyminhibitors mit Hilfe des IC50-Wertes möglich

96- oder 384-Well-Plattenformat: der Test lässt sich einfach auf das 384-Well-Plattenformat übertragen