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Pgp-GloTM
Assay System
Pgp-GloTM Assay System with P-glycoprotein
Die Pgp-GloTM Assay
Systems sind komplette Reagenziensets zur Durchführung
lumineszierender P-Glykoprotein-ATPase-Assays. Sie werden
bei Pharma- und Wirkstoffscreenings eingesetzt. Darüber
hinaus finden sie Anwendung bei der Untersuchung
verschiedener Faktoren auf die P-Glykoprotein-Enzymaktivität.
P-Glykoprotein (Pgp), auch MDR1 oder ABCB1 genannt, ist ein
170 kDa großes integrales Plasmamembranprotein, das als
ATP-abhängige Effluxpumpe aufgenommene Arzneistoffe aktiv
zurücktransportiert. Es spielt eine wichtige Rolle beim
Auftreten von Mehrfachresistenzen gegen Zytostatika (sog.
Multi Drug-Resistenzen, MDR). Verschiedene Verbindungen
interagieren mit Pgp und bewirken eine Stimulation oder eine
Inhibition seiner ATPase-Aktivität.
Das Pgp-GloTM Assay System V3601 umfasst ein
Membranpräparat mit rekombinantem humanem P-Glykoprotein.
Außerdem enthält das System ATP-Detektionssubstrat und
-puffer, Pgp-Glo-Assaypuffer, Na-Orthovanadat (Pgp-Inhibitor)
und Verapamil (Positivkontrolle, die die
Pgp-ATPase-Aktivität stimuliert). Wenn eigene
P-Glykoprotein-Präparate zur Verfügung stehen, kann das
Assaysystem V3591 verwendet werden, das kein Pgp enthält.
Im ersten Schritt wird ATP mit Pgp inkubiert. Danach wird
die Pgp-ATPase-Reaktion gestoppt und das verbliebene ATP als
Luciferase-abhängiges Lumineszenz-Signal im Luminometer
nachgewiesen. Je größer die Signalreduktion, desto größer
ist die Pgp-Aktivität. Substanzen, die die
Pgp-ATPase-Aktivität stimulieren, erzeugen somit signifikant
geringere Lumineszenzsignale als Proben, die keinen oder
negativen Einfluss auf die Pgp-ATPase-Aktivität haben.
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Merkmale |
Vorteile |
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Komplettsystem: |
Optimales Testergebnis durch aufeinander abgestimmte
Reagenzien.
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Stabilität des Signals: |
Das
stabile Signal vom Glow-Type ermöglicht die
Abarbeitung einer großen Probenzahl.
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| Wenig
Falsch-positive: |
Die
spezielle stabilisierte Leuchtkäfer-luciferase und
die besondere Formulierung des Tests reduzieren die
Möglichkeit der Luciferasehemmung durch die
Testverbindungen, was zu falsch-positiven Signalen
führen würde.
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Einfach: |
Dank
seines einfachen Testprotokolls ist der Assay
bestens geeignet für Hochdurchsatz-Screenings in
Multiwell-Mikrotiterplatten.
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| 96-
oder 384-Well-Plattenformat: |
Der
Test lässt sich einfach auf das 384-Well-Format
übertragen.
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