MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity Assay
10 ml
5 x 10 ml
2 x 50 ml
CytoTox-Fluor™
Cytotoxicity Assay
10 ml
5 x 10 ml
2 x 50 ml
Mit dem MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity Assay können
Messungen zur Zellvitalität und zur Zytotoxizität gleichzeitig
durchgeführt werden. Dazu werden die Aktivitäten zweier
Proteasen simultan bestimmt.
Die erste Protease spaltet das Substrat GF-AFC (Glycyl-Phenyalanyl-Amino-Fluorocoumarin),
das in die lebende Zelle eindringen kann. Das Produkt AFC ist
fluorogen und wird bei 400Ex/505Em gemessen. Diese Protease
verliert ihre Aktivität, sobald die Zytoplasmamembran der Zelle
zerstört ist. Sie ist ein Marker für die Vitalität der Zellen.
Die zweite Protease reagiert mit dem Substrat bis-AAF-R110 (bis-Alanyl-Alanyl-Phenylalanyl-Rhodamin
110) zu einem fluoreszenten Reaktionsprodukt (R110). Das Substrat
kann die intakte Zelle nicht penetrieren. Bei Zellen, deren
Zytoplasmamembran jedoch zerstört ist, gelangt die Protease ins
Medium und setzt ihr Substrat dort um. Die Fluoreszenz des
Spaltprodukts R110 wird bei 485Ex/520Em gemessen. Sie ist ein
Maß für die Zytotoxizität.
| Einfach |
Einfaches „Add-Mix-Measure“-Protokoll:
Einfach Reagenz zugeben, inkubieren und dann messen. |
| Multiplexing |
Simultane
Messung von Zellvitalität und Zytotoxizität in einem
Reaktionsgefäß. Eine dritte Messung kann bei Bedarf mit
einem Lumineszenzassay oder einem Fluoreszenzassay mit
unterschiedlichem Anregungs- bzw. Emissionsspektrum
durchgeführt werden. |
| Interne Kontrolle |
Eine
Proteasereaktion dient als interne Kontrolle für die
andere Proteasereaktion. |
| Normalisierung |
Das Verhältnis von lebenden zu toten
Zellen ist unabhängig von der Gesamtzahl der Zellen.
Deshalb eignet sich der Parameter zur Normalisierung
verschiedener Messungen. |
Der CytoTox-Fluor™
Cytotoxicity Assay ist ein Fluoreszenzassay zur Bestimmung
des Anteils toter Zellen in einer Population. Er entspricht dem
im MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity Assay enthaltenen
Zytotoxizitäts-Messsystem.
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