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Regulated Mammalian Expression System
Beinhaltet:
- pReg neo Vector, 20µg
- pF12A RM Flexi® Vector, 20µg
- pF12K RM Flexi® Vector, 20µg
Auch einzeln erhältlich:
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pReg neo Vector, 20µg
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pF12A RM Flexi® Vector, 20µg
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pF12K RM Flexi® Vector, 20µg
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Coumermycin A1, 5mg
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Novobiocin Sodium Salt, 1mg
Mit dem „Regulated Mammalian Expression System” kann die
Expression eines „gene of interest“ in Säugetierzellen kontrolliert
werden. Das System basiert auf einem neuen on/off -Mechanismus,
der schnell und sensitiv durch Coumerin-verwandte Verbindungen
moduliert werden kann.
Funktionsprinzip des Coumermycin/Novobiocin-regulierbaren
Genexpressionsystems:
Die Protein-kodierende Region wird in einen der beiden
pF12 RM Flexi® Vektoren kloniert, die speziell
für die regulierte Proteinexpression entwickelt wurden. Sie
enthalten regulatorische Promotorsequenzen upstream des „gene of
interest“. Für transiente Transfektionen wird der pF12A oder
der pF12K RM Flexi® Vektor mit dem einklonierten Gen, zusammen mit
dem pReg neo Vektor in Säugetierzellenzellen co-transfiziert. Der pReg neo
Vektor exprimiert das chimäre Transaktivatorprotein, welches an die
lambda Operator-Sequenz upstream des Promotors des
Expressions-Vektors binden kann und so die Proteinexpression
initiiert. Nanomolekulare Mengen des Antibiotikums Coumermycin
fördern die Dimerisierung des Transaktivators. Über die
Konzentration von Coumermycin kann so die Menge an exprimiertem
Protein kontrolliert werden. Darüber hinaus wird die Genexpression
über die Zugabe von Novobiocin, welches die Dissoziation des
dimerisierten Transaktivators fördert, schnell herunterreguliert.
Vorteile des „Regulated Mammalian Expression
Systems“:
- Hoher Level an kontrollierter Induktion kombiniert mit
niedrigem Level an basaler
Proteinexpression
- Dosis-abhängige Induktion der Proteinexpression
- Schneller und sensitiver on/off-Mechanismus für die
Proteinexpression
- Auto-Amplifikation des Transaktivatorproteins
- Exzellente pharmakokinetische Eigenschaften von Coumermycin und
Novobiocin
- Kompatibilität mit anderen Flexi® Vektoren
Abb: Schematische Darstellung des Coumermycin/Novobiocin-regulierbaren
Genexpressionsystems .
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