|
HaloTag®
pHT2 Vector, 20µg
HaloTag® TMR Ligand, 5mM, 30µl
HaloTag®
diAcFAM Ligand, 1mM 30µl
HaloTag®
Coumarin Ligand, 10 mM, 30µl
HaloTag® Oregon Green® Ligand, 30ul
HaloTag® Alexa
Fluor® 488 Ligand, 30ul
HaloTag®
Biotin Ligand, 5mM, 30µl
HaloTag® PEG-Biotin Ligand, 5 mM, 30 µl
Anti-Halo Tag®
pAB, 200 µg
Die HaloTag® Interchangeable Technology bietet neue Möglichkeiten für die
schnelle, sequenzspezifische und irreversible Markierung von
Proteinen in lebenden Zellen und in vitro. Die
Technologie basiert auf der kovalenten Bindung eines
speziell konzipierten prokaryotischen Enzyms mit spezifisch
konstruierten Liganden. Der dafür entwickelte
Klonierungsvektor kodiert eine genetisch modifizierte
Dehydrolase, die als HaloTag®-Protein
bezeichnet wird. Je nach Wunsch können Fusionsproteine am N-
oder C-Terminus vom HaloTag®-Protein
exprimiert werden.
Für Proteinmarkierungen stehen verschiedene
HaloTag®
Fluoreszenz-Liganden zur Verfügung: der
HaloTag®TMR Ligand, der
HaloTag® diAcFAM Ligand und
der
HaloTag® Coumarin Ligand.
Im Dezember 2006 hat Promega seine
Produktpalette um den HaloTag® Oregon Green® Ligand und den
HaloTag® Alexa Fluor® 488 Ligand erweitert.
Mit den HaloTag®
Fluoreszenz-Liganden können lebende Zellen für die
mikroskopische Analyse bei verschiedenen Wellenlängen
markiert und anschließend ohne Verlust des
Fluoreszenzsignals fixiert werden. Die HaloTag®
TMR, Oregon Green, diAcFAM und
Coumarinliganden durchdringen die Zellmembran. Sie können
zur Fluoreszenzmarkierung von Fusionsproteinen in
subzellulären Kompartimenten verwendet werden. Der HaloTag® Alexa Fluor® 488
Ligand kann die Zellmembran nicht durchdringen. Er wird zur
Markierung von Oberflächenproteinen und für
in-vitro-Anwendungen eingesetzt.
- Der HaloTag® Coumarin Ligand enthält
Coumarin (353 nmEx/434 nmEm).
- Der HaloTag® diAcFAM Ligand enthält ein
nicht fluoreszierendes Diacetylderivat des Fluorescein.
Durch die Abspaltung der Diacetylgruppe durch zelluläre
Esterasen wird diAcFAM in das
fluoreszierende FAM (494 nmEx/526 nmEm)
umgewandelt. Der HaloTag® diAcFAM Ligand ist seit Ende
2006 in einer optimierten Konzentration erhältlich. Die
Qualität von Imaging-Experimenten kann so in vielen
Fällen deutlich gesteigert werden. Dieses Produkt
(G8272)
ersetzt Produkt Nr. G8271.
- Der HaloTag® Oregon Green® Ligand
enthält ein nicht fluoreszierendes Diacetylderivat des
Oregon Green® 488 Fluorophor. Wird die Diacetylgruppe durch zelluläre Esterasen
abgespalten, fluoresziert der Oregon Green®
-Farbstoff (496nmEx/516 nmEm). Der Fluoreszenzligand hat eine verbesserte
Photostabilität im Vergleich zu herkömmlichen Fluoresceinen.
- Der HaloTag® Alexa Fluor® 488
Ligand enthält den Alexa Fluor® 488 Farbstoff (494 nmEx/517
nmEm). Der Ligand ist nicht zellgängig. Er
eignet sich für die Analyse von Oberflächenproteinen und
deren bi-direktionalem Transport.
- Der HaloTag® TMR Ligand enthält
Tetramethylrhodamin (TMR; 555 nmEx/585 nmEm).
Für Proteinaufreinigungen stehen ein HaloTag®
Biotin-Ligand und ein
HaloTag™
PEG-Biotin Ligand zur Auswahl. Die Verwendung des
zellpermeablen HaloTag®
Biotin-Liganden ermöglicht die spezifische Bindung an
HaloTag®-Fusionsproteinen
in intakten Zellen vor der Zelllyse. Mit Hilfe des HaloTag®
PEG-Biotin Liganden können HaloTag®-Fusionsproteine
direkt aus Zelllysaten effizient gebunden werden. Die
Aufreinigung erfolgt anschließend über die Bindung an
Streptavidin-gekoppelten magnetischen Beads. Der Anti HaloTag® pAb ist ein aufgereinigter
polyklonaler Antikörper aus Kaninchen, der der gegen das HaloTag® Protein
gerichtet ist. Der Antikörper ist zur hochsensitiven und
hochspezifischen Detektion von HaloTag® Fusionsproteinen in Western
Blots und immunocytochemischen Anwendungen.
Merkmale / Vorteile
• Ein einziges genetisches Konstrukt für verschiedene
Anwendungen
• Anwendung bei lebenden oder fixierten Zellen
• Schnelle Zell-zu-Gel Analytik
• Pull down von Proteinkomplexen Siehe auch:
HaloTag® reaktive
Liganden,
HaloTag® Flexivektoren,
Halo Link Resin |
