Analyse von Proteinfunktionen
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Um die Entwicklung und die Physiologie / Pathophysiologie von Organismen zu verstehen, sind Informationen über die Regulation der Protein-Expression, Proteinmodifikation, Protein-Protein-Interaktionen und Proteinfunktionen essentiell.
Allgemein gibt es zwei Hauptwege, um Proteinfunktionen zu untersuchen.
Entweder wird ein zu untersuchendes Protein als Fusionsprotein mit einem Fluoreszenzprotein in lebenden Zellen exprimiert oder es wird als Fusionsprotein mit Affinitätstags exprimiert, aufgereinigt und für weitere Analysen bereit gestellt.
In beiden Fällen werden Protein-Tags unterschiedlicher Art benötigt, die für die jeweilige Anwendung sehr gut geeignet sind, aber keine Flexibilität für die andere Anwendung besitzen. Fluoreszenzproteine als Protein-Tag sind für das Imaging hervorragend geeignet, sind aber dagegen für die Proteinaufreinigung nicht anwendbar. Umgekehrt sind Affinitätstags hervorragend für die Proteinaufreinigung an einer Affinitätsmatrix, aber für das Imaging völlig ungeeignet. Diese Limitierung wird durch die Verwendung der HaloTag® Technologie aufgehoben. Der neue Protein-Tag vereinigt mit einem einzigen Tag sowohl die Möglichkeiten des Imaging als auch die der Proteinaufreinigung an einer Matrix.
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HaloTag® Technologie
Ein Protein-Tag für universelle Anwendungen
Basis der HaloTag® Technologie ist das HaloTag® Protein, welches bekannte Affinitätstags (His, GST, HA etc.) ersetzt. Das HaloTag® Protein bindet Liganden mit unterschiedlichen funktionellen Gruppen und ist damit für viele verschiedene Applikationen zugänglich. Unter physiologischen Bedingungen bindet das HaloTag® Protein innerhalb von Sekunden kovalent an den HaloTag® Liganden. Die Bindung ist irreversibel, so dass der Komplex auch unter stringenten Waschbedingungen stabil bleibt. HaloTag® wird nicht endogen in Säugerzellen oder in E. coli exprimiert und ist nicht toxisch. Die HaloTag® Liganden bestehen aus einem reaktiven Linker und einem funktionellen Teil, der aus Fluoreszenzfarbstoffen, Biotin-Affinitätstag oder einem festen Trägermaterial bestehen kann. Mit HaloTag® getaggte Proteine können nach Bindung an HaloTag® Fluoreszenz-Liganden direkt per SDS-PAGE oder im FACS® nachgewiesen werden
Schematische Darstellung der HaloTag® Technologie
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