Proteincharakterisierung
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1. Trypsin-Gold
Die Qualität der Proteasen ist ein wichtiger Baustein für eine erfolgreiche Probenvorbereitung. Trypsin von geringer Qualität unterliegt häufig einer Autoprotolyse, die zur Bildung von
Pseudotrypsin mit Chymotrypsin-ähnlicher Aktivität führt. Eine solche Aktivität in einem Probenansatz würde zusätzliche Peptidfragmente generieren, die mit der späteren Datenbankanalyse interferieren können. Zusammen mit ProteaseMax™ bilden die Trypsinpräparationen ein unschlagbares Team bei der Proteinprobenvorbereitung für die MS Analyse.
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Vorteile:
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| Anwenderfreundlich |
Kompatibel mit ProteaseMax™ Surfactant, Trypsin Enhancer |
| Stabil |
Resistent gegenüber milden denaturierenden Bedingungen |
| Zuverlässig |
Reduktive Methylierung verhindert den autolytischen Verdau |
| Sicher |
Behandlung mit TPVK inaktiviert Chymotrypsin |
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2. ProteaseMax™
Der ProteaseMax™ Surfactant, Trypsin Enhancer ist ein neues Reagenz, das den Trypsinverdau insbesondere bei Membranproteinen verbessert und die Peptidausbeute bei Gelextraktionen erhöht. ProteaseMax™ ist so konzipiert, dass es über den Verlauf eines Trypsinverdaus degradiert und daher die MS Analyse nicht stört.
Abb.: Ein zytoplasmatischer Proteinextrakt aus dem Herzen einer Maus wurde auf einem 4-20% SDS-PAGE Gel elektrophoretisch aufgetrennt. Anschließend wurde die Proteinbande mit der Masse von 47 kDa aus dem Gel ausgeschnitten, tryptisch verdaut und massenspektroskopisch untersucht.
A. Standardverdauprotokoll ohne ProteaseMax™ über Nacht bei 37°C
B. Mit ProteaseMax™ über 3 Stunden bei 37°C
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Vorteile:
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| Schnell |
Verkürzt den Trypsinverdau auf 1 Stunde, verbesserte Peptidausbeute |
| Zuverlässig |
Bessere Sequenzabdeckung und höhere MASCOT scores |
| Anwenderfreundlich |
Keine nachträgliche Inaktivierung notwendig, beeinflusst nicht die MS Analyse |
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3. Immobilisiertes Trypsin
Immobilisiertes Trypsin erlaubt den schnellen und einfachen Verdau von Proteinen in Lösung. Die Elution der verdauten Peptide erfolgt mittels Zentrifugation, wobei das Trypsin auf der Säule verbleibt.
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Vorteile:
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| Schnell |
Proteolytischer Verdau innerhalb von 30 Minuten |
| Skalierbar |
Erlaubt den Verdau unterschiedlichster Proteinmengen |
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Video-Protokoll (26MB, mov) »
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4. Endoproteinase Lys-C
Lys-C hydrolisiert spezifisch am C-terminalen Ende von Lysin.
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Vorteile:
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| Robust |
Funktionalität von Lys-C im pH-Bereich von 7,0 - 9,0 |
| Flexibel |
Verdau in Lösung und in-Gel Verdau möglich |
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