Proteinaufreinigung

Themen auf dieser Seite:
1. HaloLink™ Resin »
2. Spaltung von Fusionsproteinen »

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1. HaloLink™ Resin

HaloLink™ Resin bietet die einfachste und schnellste Möglichkeit, HaloTag® Fusionsproteine für weitere Anwendungen aufzureinigen.
HaloLink™ Resin besteht aus einem HaloTag® Liganden, der an Sepharose® Beads gebunden ist und spezifisch und schnell HaloTag® Fusionsproteine bindet. HaloTag® Fusionsproteine besitzen eine ProTev Erkennungssequenz, die die Abspaltung des HaloTags® vom Fusionsprotein ermöglicht.

Anwendungen:
Kovalente Immobilisierung von HaloTag® Fusionsproteinen

HaloTag® Fusionsprotein
äquivalente Mengen von HaloLink™ Resin bzw. GSH Beads wurden mit HaloTaq® Fusionsprotein inkubiert:
Spur 1: HaloTag®-GST Fusionsprotein
Spur 2: Überstand HaloLink™ Resin + HaloTag®-GST Fusionsprotein (10min)
Spur 3: Überstand HaloLink™ Resin + HaloTag®-GST Fusionsprotein (24h)
Spur 4: Überstand GSH Beads + HaloTag®-GST Fusionsprotein (10min)
Spur 5: Überstand GSH Beads + HaloTag®-GST Fusionsprotein (24h)

Vorteile:
Geringer Background	Stringentes Waschen wegen kovalenter Bindung möglich
Gerichtete Immobilisierung	Maximale Enzymaktivität der gebundenen Proteine
Hohe Bindungskapazität	1ml Resin bindet > 7mg HaloTag® Fusionsprotein
Einfach	Zusätzliche Aufreinigung ist nicht notwendig

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2. Proteolytische Spaltung von Fusionsproteinen

ProTEV Protease
Die ProTEV Protease spaltet Affinitätstags von Fusionsproteinen mit
ProTEV Erkennungsmotiven während oder nach der Aufreinigung.


Abb.: 20 µg des HaloTag-MBP Fusionsproteins wurden an HaloLink™ magnetischen Beads gebunden und gewaschen. Anschließend wurder das HaloLink™ Resin mit der entsprechenden Konzentration ProTEV Protease über Nacht bei 4°C inkubiert.
Spur 1: HaloTag®-MBP Fusionsprotein
Spur 2: HaloTag®-MBP Fusionsprotein und 5 Units ProTEV Protease
Spur 3: HaloTag®-MBP Fusionsprotein und 10 Units ProTEV Protease
Spur 4: HaloTag®-MBP Fusionsprotein und 20 Units ProTEV Protease
 

Vorteile:
Hohe Spezifität	Fusionsproteine mit einer ProTEV Erkennungsstelle werden zuverlässig gespalten
Flexibel	Das Protein kann in Lösung vorliegen oder an eine Affinitätsoberfläche gebunden sein
Robust	Funktionalität von ProTEV im pH Bereich von 5,5 - 8,5 und bei 4°C bis 34°C nachgewiesen

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