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mit N-terminalem HaloTag®
Vektoren mit N-terminalem HaloTag® für die
Proteinexpression in Säugerzellen
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vielseitig
effiziente Proteinexpression in Pro-
und Eukaryoten sowie zellfreien Systemen
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flexibel
variable MCS, unterschiedliche
Antibiotikaresistenzen
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Downstream-Applikationen
in vivo Zell-Imaging, Co-Lokalisierungsstudien,
Pull-Downs, HTP kompatibel
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WICHTIG
Ihr Insert muss ein Stoppcodon im Leserahmen
besitzen, um die korrekte Termination der
Translation sicher zu stellen.
pHTN HaloTag® CMV-neo Vektoren
Mit dem non-Flexi CMV-neo Vektor pHTN können Halo
Tag® Fusionsproteinen in Säugerzellen exprimiert
werden. Die Proteinexpression wird über einen
CMV-Promotor reguliert. Verschiedene
MCS-Restriktionsschnittstellen ermöglichen, mittels
PCR- und Restriktions-Analyse traditionell zu
klonieren. Als Selektionsmarker trägt der
pHTC-Vektor eine Ampicillin-Antibiotikaresistenz.
Die Genexpression kann transient und stabil
erfolgen. Die stabile Expression wird über eine
zusätzliche Resistenz gegenüber dem Antibiotikum
G-418 (Cat. # V7981) kontrolliert. Das dafür
erforderliche Gen der Neomycin-Phosphotransferase
wird über einen SV40 Promotor reguliert. Auf
Proteinebene ist der HaloTag®-Fusionsanteil am N
terminalen Ende des POI lokalisiert. Nach der
Proteinexpression ist es möglich den HaloTag®-
Fusionsanteil durch eine TEV Protease zu entfernen.
HaloTag® CMV-neo Flexi® Vektoren
Das HaloTag®CMV-neo Flexi® System ermöglicht,
schnell und effizient mit verschiedenen Flexi®
Vektoren zu klonieren. Die MCS ist auf zwei
Schnittstellen der beiden seltenen
Restriktionsenzyme SgfI und PmeI begrenzt. Dieses
Vektor-System bietet den Vorteil, zeit- und
kostenaufwändige Resequenzierungen umgehen zu
können. Die Anzahl falschpositiver Klone wird über
das letal wirkende und in den Originalvektoren
intakte Barnase-Gen reduziert. Über das Einbringen
des Inserts wird das Barnase-Gen inaktiviert. Sodann
ist eine Selektion auf die Insert-enthaltenden
Plasmide in überlebensfähigen Klonen möglich. Mit
dem HaloTag® CMV-neo Flexi® kann zwischen den
Antibiotikaresistenzen Ampicillin und Kanamycin
gewählt werden.
| Vektoren |
Typ |
Position
des HaloTag® |
Antibiotikaresistenz |
Produktnummer |
| pHTC |
non-Flexi |
C- (carboxy-)
terminal |
Ampicillin |
G7711 |
| pFC27A |
Flexi |
C- (carboxy-)
terminal |
Ampicillin |
G8421 |
| pFC27K |
Flexi |
C- (carboxy-)
terminal |
Kanamycin |
G8431 |
| pHTN |
non-Flexi |
N- (amino-)
terminal |
Ampicillin |
G7721 |
| pFN28A |
Flexi |
N- (amino-)
terminal |
Ampicillin |
G8441 |
| pFN28K |
Flexi |
N- (amino-)
terminal |
Kanamycin |
G8451 |
Anwendungen:
Links:
Flexi® Vektor Primer Design Tool