ApoTox-Glo™ Triplex Assay

einfach Zugeben, Mischen, Messen	aussagekräftig durch Multiplexing	Technical Manual »
flexible und automatisierbar in 96- und 384-well Formaten durchführbar	effizient drei Assays in einem Well
interne Kontrolle Verhältnis lebender zu toter Zellen unabhängig von Zellzahl
Weitere Informationen im Online-Shop »

Der ApoTox-Glo™ Triplex Assay ist ein neuartiges Multiplex-Analysesystem um Viabilität, Zytotoxizität und Apoptose von Zellkultur-Zellen in einem Well zu bestimmen. Der Triplex Assay misst die drei Parameter in zwei Schritten über Fluoreszenz und Lumineszenz. Im ersten Teil des Assays wird die Zellviabilität und Zytotoxizität über zwei Protease-Aktivitäten gemessen. Das fluorogene Peptidsubstrat Glycylphenylalanyl-Aminofluorocoumarin (GF-AFC) gelangt durch die Zellmembran in das Zellinnere. Dort wird es durch eine Protease, die nur in lebenden Zellen aktiv ist, in das fluoreszierendes Produkt AFC gespalten. Verliert die Zelle ihre Membranintegrität dann verliert die Protease ihre Aktivität. In dem Fall wird ein zweites Peptidsubstrat (Bis-Alanylalanyl-Phenylalanyl-Rhodamine 110; Bis-AAF-R110), das nicht durch Zellmembranen kann, von einer Zelltod-spezifischen Protease in das fluoreszierende Produkt R110 gespalten. AFC und R110 haben verschiedene Exzitations- und Emissionsspektren und können so zur gleichen Zeit detektiert werden.

Die Anzahl apoptotischer Zellen wird im zweiten Schritt über das luminogene Caspase-3/7 Substrat mit der Tetrapeptidsequenz DEVD (Aspartat, Glutamat, Valin, Aspartat) bestimmt. Die Caspase-Glo® 3/7 Reagenz wird nach der Fluoreszenz-Messung zu den Zellen gegeben. Das Substrat wird von den Caspasen aus den apoptotischen Zellen umgesetzt und dient dann der Hitze-stabilen Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase als Substrat. Das Signal der Luciferase-Reaktion ist hierbei die sehr stabile, "glow-type" Lumineszenz.

Anwendungen:

• Zelltod-Forschung
• Screening von Wirkstoff-Bibliotheken auf zytotoxische Wirkung