UGT-Glo™ Assay

Schnell Lumineszenz-basiert, keine zeitintensive Analysen wie HPLC und LC/MS notwendig	Genau keine Fluoreszenz-Interferenz, da Lumineszenz-basiert	Protokoll (PDF) »
		Effektiv Auch im high-throughput Format durchführbar
	Sensitiv wenig Enzym und geringe Reaktionsvolumen reichen aus
		Einfach einfaches Protokoll mit wenigen Schritten
Weitere Informationen im Online-Shop »

Die UDP-Glucuronosyltransferase (UGT) ist ein wichtiges Mitglied der Familie der humanen Phase-II-metabolisierenden Enzyme und findet sich vor allem in der Leber. Die UGT überträgt Glucuronosyl-Gruppen der UDP-Glucuronsäure (UDPGA) auf kleine und hydrophobe Moleküle. Die UGT-vermittelte Reaktion wandelt so xenobiotische und endogene Stoffe in besser lösliche und damit einfacher auszuscheidende Stoffe um. UGTs modifizieren viele pharmazeutische Wirkstoffe und können so an Wirkstoff-Wirkstoff-Interaktionen beteiligt sein.

Der UGT-Glo™ Assay basiert auf einer an Lumineszenz gekoppelten Reaktion (Abbildung). Entsprechend der UGT-Aktivität wird ein Proluciferin-Substrat mit UDP konjugiert. Verbliebenes unkonjugiertes Proluciferin zyklisiert unter Zugabe von D-Cystein zu Luciferin, welches dann durch die Luciferase in Licht umgesetzt wird. UDT-konjugiertes Proluciferin reagiert nicht mit D-Cystein und trägt so nicht zur Lumineszenz bei. Höhere UTP-Aktivität führt folglich zu stärkerer Abnahme der Lumineszenz im Vergleich zur Referenz ohne UGT.

Im UGT-Glo™ Assay (Kat.Nr. V2081, V2082) können Transferasen aus verschiedenen Quellen eingesetzt werden, z.B. in Mikrosomen rekombinant exprimierte UGT oder UGT aus Säugetier-Gewebe. Der Assay eignet sich u.a. zur Untersuchung der Inhibierung von UGT durch Chemikalien und pharmazeutische Wirkstoffe. Der UGT-Glo™ Assay enthält zwei verschiedene Proluciferin-Substrate. Zum einen das UGT-Multienzym-Substrat, das mit vielen UGTs kompatibel ist. Zum anderen das UGT1A4 Substrat. Letzteres reagiert spezifisch mit der UGT-Isoform UGT1A4. Zum Kit gehört weiterhin das Luciferin-Detektionsreagenz sowie Rekonstitutionspuffer, UGT-Puffer, D-Cystein und UDPGA.

Die UGT-Glo™ Screening Systeme beinhalten bereits Mikrosomen mit den beiden wichtigen Isoformen UGT1A1 bzw. UGT2B7 (UGT1A1: Kat.Nr. V2120, V2121, UGT2B7: Kat.Nr. V2130, 2131).

Abbildung
Konversion der UDP-Glucuronosyltransferase (UGT) Multienzyme-Substrate durch UGT Enzyme. Die UGT hängen eine Glucuronsäure-Gruppe an Proluciferin-Substrate. Während des Detektionsschritts zyklisiert das unkonjugierte Proluciferin mit D-Cystein zu Luciferin und wird dann durch die Luciferase in Licht umgesetzt. Konjugiertes Proluciferin kann nicht zu Luciferin umgesetzt werden und so kein Licht produzieren. Die Lichtstärke ist umgekehrt proportional zur UGT-Enzymaktivität.

nach oben