Protease-Glo™ Assay

Flexibel Für alle Proteasen einsetzbar	Protokoll (PDF) »
	Sensitiv Lumineszente Messmethode	Universell Erzeugung eigener Protease-Erkennungsstellen
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Der Protease-Glo™ Assay ermöglicht eine hoch sensitive, schnelle und einfache Methode zur Untersuchung von Proteaseaktivität. Als Reporter dient das GloSensor™ Protein, eine genetisch modifizierte Firefly Luciferase, die erst nach proteolytischer Spaltung aktiviert wird.

Das System beinhaltet den pGloSensor™-10F Linear Vektor, der das GloSensor™ Gen trägt. Dieser Vektor trägt eine einmalig vorkommende Klonierungsstelle für Oligonukleotide, die für Protease-Erkennungsstellen kodieren sollen.
Für ein optimales Oligodesign durch Eingabe der Aminosäuresequenz steht ein webbasiertes Tool zur Verfügung unter
www.promega.com/techserv/tools/proteaseglo/.
Der Protease-Glo™ Assay ist zur Untersuchung jeder beliebigen Protease geeignet und kann auch in Screenings eingesetzt werden.

Die Expression der genetisch modifizierten Luciferase erfolgt dabei in vitro mittels des TNT® SP6 High Yield Wheat Germ Protein Expressions Systems. Zur Bestimmung der Luciferaseaktivität werden Aliquots des Ansatzes jeweils mit bzw. ohne Proteaseverdau unter Zugabe des Bright-Glo™ Luciferase Assay Substrates gemessen. Dabei korreliert die Aktivität der zu untersuchenden Protease mit der Spaltung der genetisch modifizierten Luciferase und damit mit den bei der Luciferasereaktion generierten relativen Lichteinheiten.

Der Protease-Glo™ Assay umfasst alle notwendigen Reagenzien für die Klonierung, Expression und Detektion der Luciferase. Daneben enthält der Assay eine positive Kontrolle, bestehend aus dem pGloSensor™-10F (TEV) Plasmid und der ProTEV Protease. Die Komponenten des Assays sind zurzeit nur für die in vitro Anwendung geeignet.