Die P450-Glo™ Assays sind
Lumineszenz-Testsysteme zur Bestimmung der
Cytochrom P450-Enzymaktivität aus rekombinanten
oder nativen Quellen. Die P450-Glo™-Assays
werden vor allem in der Pharma-Entwicklung oder
der Wirkstoffforschung eingesetzt, um den
Einfluss von Medikamenten, Chemikalien oder
anderen Wirkstoffen auf die P450-Aktivität zu
untersuchen. Alle P450-Lumineszenzassays
besitzen eine ausgezeichnete Sensitivität, eine
geringe Hintergrundsignalstärke und einen
breiten Dynamikbereich.
Die in den Assays enthaltenen P450-Substrate sind
Derivate des Leuchtkäfer-Luciferins. Sie werden mit
dem jeweiligen P450-Enzym und einem
NADPH-Regenerationssystem zu Luciferin(-EGE)
umgesetzt. Luciferin(-EGE) reagiert mit Hilfe einer
stabilen Luciferase, die ebenfalls im System
enthalten ist, unter Emission eines stabilen
Lichtsignals. Die Halbwertzeit des Signals beträgt
mehr als zwei Stunden. Das Lumineszenzsignal ist
proportional zur P450-Aktivität und wird in einem
Luminometer gemessen.
Die P450-GloTM CYP Assays (V8901, V8902)
enthalten ein neues Substrat für Cytochrom 3A4,
Luciferin-PFBE, das sehr gut für zellbasierte
Anwendungen, z.B. zur Untersuchung der
3A4-Geninduktion, geeignet ist. Das neue Substrat
ist hochspezifisch für CYP3A-Isoforme und besitzt
keine Cross-Reaktivität mit CYP4F12. Auch der
Signalhintergrund ist geringer als bei Luciferin-BE,
dem herkömmlichen 3A4 Substrat.
Die P450™ CYP3A4 Assays Luciferin PPXE
(V8911, V8912; Screening System V9910) sind
DMSO-tolerant. Bis zu 0,2% des Lösungsmittels
Dimethylsulfoxid (DMSO) werden ohne eine Veränderung
des Signal-Hintergrundverhältnisses toleriert. Eine
Cross-Reaktivität mit CYP4F12 tritt nicht auf.
Bestimmung der Cytochrom P450-Enzymaktivität aus
rekombinanten oder nativen Quellen