Mitochondrial ToxGlo™ Assay

Mit dem Multiplexing Mitochondrial ToxGlo™ Assay können durch Xenobiotika verursachte mitochondriale Dysfunktionen in Zellen nachgewiesen werden. Der zellbasierte Assay basiert auf der sequenziellen Messung zweier Biomarker: (1) der Änderungen der Zellmembran-integrität und (2) dem zellulären ATP-Gehalt. Beide Messparameter können mit dem Add-Mix-Measure- Format in einer einzigen Probe in weniger als einer Stunde ausgelesen werden. Der Assay wird direkt in der Zellkulturplatte durchgeführt und ist leicht zu automatisieren.

Einsatz bewährter Reagenzien kombiniert mit neuer Schlüsseltechnologie
Die Abnahme des ATP-Gehalts gilt als standardisierter Biomarker für die mitochondriale Dysfunktion. Nekrotische Prozesse können jedoch auch eine Mitochondrien-unabhängige Veränderung des ATP-Gehalts verursachen. Mit dem Mitochondrial ToxGlo™ Assay wird daher die Membranintegrität als zusätzlicher Messparameter für nekrotische Veränderungen bestimmt: Im ersten Schritt wird die Zellmembranintegrität über die An- bzw. Abwesenheit der sogenannten Dead-Cell-Protease bestimmt. Dazu wird ein fluorogenes Peptidsubstrat (bis-AFF-R110) eingesetzt. Dieses kann die intakte Zellmembran nicht passieren und wird erst nach Zelllyse durch die Proteasen in eine messbare Form umgesetzt. Im zweiten Schritt wird –in der selben Probe- der ATP-Gehalt der Zelle über ein ATP-Detektionsreagenz bestimmt. Dieses Reagenz führt zur Lyse der Zellen und der ATP-Gehalt wird in einer Luciferase-Reaktion gemessen. Die Kombination beider Datensätze, d.h. Zellmembranintegrität und ATP-Gehalt, erlaubt die Unterscheidung zwischen mitochondrialer Funktionsstörung und nicht-mitochondrialen zytotoxischen Mechanismen.