CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Integrity Assay

Nicht radioaktiv Fluorometrischer Nachweis. Anwendungsbeispiel »	Protokoll (PDF) »	Sensitiv Nachweis von ca. 1000 geschädigten Zellen im 96-Well Format und ca. 200 Zellen im 384-Well Format
Einfach Messung der freigesetzten LDH direkt im Well, kein Transfer des Überstandes notwendig	Schnell Ergebnisse in 10 Minuten	Multiplexing Durchführung anderer zellbasierter Assays mit der gleichen Probe möglich. Anwendungsbeispiel »
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Mit dem CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Integrity Assay kann sowohl die zytotoxische Wirkung von Substanzen auf zelluläre Systeme als auch die zellvermittelte Zytotoxizität (z.B. Immunantwort) gemessen werden.

Werden Zellen geschädigt, verliert die Zellmembran ihre Integrität, und es gelangen zytosolische Substanzen und Proteine in den extrazellulären Raum. Eines der Enzyme ist die Laktatdehydrogenase (LDH), die Laktat zu Pyruvat oxidiert. Dabei werden Reduktionsäquivalente auf NAD übertragen. Die gewonnenen Reduktionsäquivalente werden in einer weiteren Reaktion durch Diaphorase auf Resazurin übertragen, welches damit zu Resorufin reduziert wird. Die Reduktion zu Resorufin hat zur Folge, dass die Substanz fluoresziert und im Fluorometer gemessen werden kann (Ex_max 560 nm/Em_max 590 nm).

Die Inkubationsdauer mit dem Zytotoxreagenz beträgt 10 Minuten und wird durch Zugabe eines Stopp-Puffers beendet. Das gemessene Signal ist proportional zur Menge an freigesetzter LDH und damit auch zur Zahl geschädigter Zellen.

Der sensitive Assay (Nachweis von 200 bis 1000 Zellen/Well) wird in einer 96- oder 384-Well-Mikrotiterplatte durchgeführt, kann jedoch auch auf andere Assayformate übertragen werden. Das System ist nicht radioaktiv und schnell durchzuführen.

Zudem kann der Assay im gleichen Versuchsansatz mit anderen Fragestellungen wie z. B. Zellproliferation (CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay) oder Apoptose (Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay) kombiniert werden.