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Assay
Der cAMP-Glo™ Assay ist ein robuster,
hoch-sensitiver Biolumineszenztest zur Messung
des cAMP-Gehalts intakter Zellen. Der Assay im
Multiwell-Format ist speziell für
Hochdurchsatzanwendungen konzipiert. Bereits in
weniger als einer Stunde ist die maximale
Signalstärke erreicht. Das
Signal-Hintergrundverhältnis des cAMP-Glo™ Assay
gehört zu den höchsten aller auf dem Markt
erhältlichen Assays.
Funktionsprinzip des cAMP-Glo™ Assays:
Wenn ein Agonist am G-Protein gekoppelten Rezeptor
(GPCR) bindet, kommt es zur Aktivierung der
Adenylatcyclase und dadurch zu einer Erhöhung der
intrazellulären cAMP-Konzentration. cAMP stimuliert
das Proteinkinase A (PKA) Holoenzym, was zu einer
Herabsetzung der intrazellulären ATP-Konzentration
führt (vgl. Abb.).
Die Ultra-Glo™ Luciferase katalysiert die
ATP-abhängige Umsetzung des Substrats Luciferin zu
einem stabilen Lumineszenz-Signal. Abhängig von der
Wirkung der Testsubstanz auf den GPCR und die
intrazellulären cAMP- bzw. ATP-Konzentrationen wird
die Luciferase-katalysierte Lichtemission mehr oder
weniger stark reduziert (vgl. Abb.).
Anwendungen:
Hochdurchsatz-Analysen von Compound-Bibliotheken
für die Identifizierung von GPCR-Aktivität