ApoLive-Glo™ Multiplex Assay

effizient zwei Messungen in einem Well	einfach anzuwenden zugeben − mischen − messen	interne Kontrolle Verhältnis lebender zu toter Zellen unabhängig von Zellzahl
flexibel und automatisierbar in 96- und 384-well Formaten durchführbar	Technical Manual »
sensitiv detektiert auch kleine Veränderungen
Weitere Informationen im Online-Shop »

Das ApoLive-Glo™ Multiplex Assay ermöglicht die Messung von Zellviabilität und Apoptose in einem Well. Er verbessert dadurch − im Vergleich zu einer Messung mit einem Single-Parameter Assay − die Qualität der Daten deutlich. Gleichzeitig reduziert er den Zeit- und Kostenaufwand.

Viabilität mit Fluoreszenz visualisieren

Im ersten Teil des Assays wird über eine "Live-cell"-Protease-Aktivität die Zellviabilität gemessen. Diese Protease ist in vielen Zelllinien präsent und nur in lebenden Zellen aktiv. Das fluorogene Peptidsubstrat Glycylphenylalanyl-Aminofluorocoumarin (GF-AFC) gelangt durch die Zellmembran in das Zellinnere. Dort wird es durch "Live-cell"-Protease in das fluoreszierendes Produkt AFC gespalten. Das Signal ist proportional zur Anzahl lebender Zellen im Ansatz. Verliert die Zelle ihre Membranintegrität, nimmt das Signal ab.

Apoptotische Zellen mit Lumineszenz bestimmen

Die Anzahl apoptotischer Zellen wird im zweiten Schritt über das luminogene Caspase-3/7-Substrat mit der Tetrapeptidsequenz DEVD (Aspartat, Glutamat, Valin, Aspartat) bestimmt. Das Substrat wird von aktivierten Caspasen-3/7 in apoptotischen Zellen umgesetzt und dient dann der Hitze-stabilen Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase als Substrat. Das entstehende, sehr stabile, "glow-type" lumineszente Signal der Luciferase-Reaktion ist proportional zu der Anzahl apoptotischer Zellen.

Anwendungen:

• Toxizitätsstudien in Grundlagenforschung und Medikamentenentwickl
• Screening und Profiling von Wirkstoff-Bibliotheken auf zytotoxische Wirkung