Die Pgp-Glo™ Assay Systems sind komplette
Reagenziensets zur Durchführung lumineszierender
P-Glykoprotein-ATPase-Assays. Sie werden bei Pharma-
und Wirkstoffscreenings eingesetzt. Darüber hinaus
finden sie Anwendung bei der Untersuchung
verschiedener Faktoren auf die
P-Glykoprotein-Enzymaktivität.
P-Glykoprotein (Pgp), auch MDR1 oder ABCB1 genannt,
ist ein 170 kDa großes integrales
Plasmamembranprotein, das als ATP-abhängige
Effluxpumpe aufgenommene Arzneistoffe aktiv
zurücktransportiert. Es spielt eine wichtige Rolle
beim Auftreten von Mehrfachresistenzen gegen
Zytostatika (sog. Multi Drug-Resistenzen, MDR).
Verschiedene Verbindungen interagieren mit Pgp und
bewirken eine Stimulation oder eine Inhibition
seiner ATPase-Aktivität.
Das Pgp-Glo™ Assay System V3601 umfasst ein
Membranpräparat mit rekombinantem humanem
P-Glykoprotein. Außerdem enthält das System
ATP-Detektionssubstrat und -puffer,
Pgp-Glo-Assaypuffer, Na-Orthovanadat (Pgp-Inhibitor)
und Verapamil (Positivkontrolle, die die
Pgp-ATPase-Aktivität stimuliert). Wenn eigene
P-Glykoprotein-Präparate zur Verfügung stehen, kann
das Assaysystem V3591 verwendet werden, das kein Pgp
enthält.
Im ersten Schritt wird ATP mit Pgp inkubiert. Danach
wird die Pgp-ATPase-Reaktion gestoppt und das
verbliebene ATP als Luciferase-abhängiges
Lumineszenz-Signal im Luminometer nachgewiesen. Je
größer die Signalreduktion, desto größer ist die
Pgp-Aktivität. Substanzen, die die
Pgp-ATPase-Aktivität stimulieren, erzeugen somit
signifikant geringere Lumineszenzsignale als Proben,
die keinen oder negativen Einfluss auf die
Pgp-ATPase-Aktivität haben.