Calpain-Glo™ Protease Assay

Der Calpain-Glo™ Protease Assay ist ein schneller und äußerst sensitiver lumineszenter Assay zur Messung der Proteaseaktivitäten von Calpain I und II.

Calpaine gehören zur Familie der Ca²⁺-aktivierten Cysteinproteasen. Sie modulieren die biologische Aktivität ihrer Substrate durch gezielte Proteolyse und sind an der Regulation vieler Ca²⁺-abhängiger zellulärer Prozesse beteiligt. Calpaine spielen eine Rolle bei der Entstehung verschiedener Krankheiten, wie z.B. Morbus Alzheimer oder Gewebeschädigungen bei verschiedenen Herz- und Hirnkrankheiten.

Der Calpain-Glo™-Protease Assay enthält ein luminogenes Succinyl-Calpain-Substrat (Suc-LLVY-Aminoluciferin) in einem für Calpain und Luciferase optimierten Puffersystem. Durch Proteolyse des Calpain-Substrats entsteht Aminoluciferin, das sofort durch Luciferase umgesetzt wird. Das mit der Reaktion einhergehende stabile lichtemittierende Signal ist proportional zur Calpainaktivität.

Der Calpain-Glo™ Protease Assay ist der erste biolumineszente Calpainassay. Seine Sensitivität ist ungewöhnlich hoch, da sie nicht von einer Akkumulation des Calpain-Spaltprodukts abhängt. Aufgrund seiner unmittelbaren Umsetzung durch die Luciferase wird die maximale Sensitivität schon 5-10 min nach der Inkubation mit Calpain erreicht. Der Calpain-Glo™ Protease Assay ist daher besonders für schnell autolysierende Enzyme wie Calpain geeignet. Aufgrund seiner außerordentlich hohen Reaktionsgeschwindigkeit und Sensitivität kann das Testsystem in Hochdurchsatz-Screenings nach Calpainaktivitäten und Calpaininhibitoren im Multiwell-Format eingesetzt werden.